放射免疫测定胰岛素

材料及试剂

1．胰岛素标准品(不同浓度的)

2．¹²⁵I－胰岛素

3．抗血清

4．第二抗体

5．分析试剂为0.05 Mol/L pH7.4 PBS液＋1％正常兔血清。

6． －计数仪

7．试管、加样器、离心机等

操作方法：

1．按表进行。

胰岛素RIA测定方法(单位：μu/ml)

	标准管						待测管
	0	10	20	40	80	160	1	2
试管号	1，2	3，4	5，6	7，8	9，10	11，12	13，14	15，16
标准品(不同浓度)	100	100	100	100	100	100
待测血清							100	100
抗血清(二抗)	100	100	100	100	100	100	100	100
分析试剂	100	100	100	100	100	100	100	100
混匀， 37 ℃ 温育2h
125I－胰岛素	100	100	100	100	100	100	100	100
混匀， 37 ℃ 温育1h
第二抗体	100	100	100	100	100	100	100	100
混匀， 37 ℃ 反应30min

2．测定和计算反应完毕后，将各管于室温3 000 r/ min离心30min，仔细吸取上清液，收集于放射性废液贮存容器内。用 －计数仪分别测量各管沉淀物(B)的放射性强度(cpm)，以两管的cpm均值表示。再以第1，2管的cpm值为Bo，分别计算结合率(B%，即B/Bo×100%)，用B%为纵坐标，不同浓度胰岛素标准品为横坐标，绘制标准曲线。然后根据待检管的B%，从标准曲线中即可查得胰岛素的相应含量。